原理

原位雜交技術(shù)是在一定的溫度和離子濃度下，使具有特異序列的單鏈探針通過(guò)堿基互補(bǔ)規(guī)則與組織細(xì)胞內(nèi)待測(cè)的核酸復(fù)性結(jié)合而使得組織細(xì)胞中的特異性核酸得到定位，并通過(guò)探針上所標(biāo)記的檢測(cè)系統(tǒng)將其在核酸的原有位置上顯示出來(lái)。

經(jīng)特定標(biāo)記的核苷酸鏈為探針，可與組織切片、細(xì)胞或染色體標(biāo)本中的待檢DNA片段或mRNA進(jìn)行雜交，然后顯示標(biāo)記物，從而分析待檢核酸的分布和含量。利用此項(xiàng)技術(shù)可研究各種基因在染色體上的定位，編碼某種蛋白質(zhì)的mRNA在胞質(zhì)中的表達(dá)。

原位雜交天

1. 重新水化和固定

1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。

2） 置換成30%的PBST溶液，放置5分鐘

3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復(fù)一次

4） 置換成4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘5） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。

蛋白酶處理與后固定（本實(shí)驗(yàn)不做此步）

1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理，5體節(jié)到24小時(shí)的胚胎處理3分鐘，24小時(shí)以上的胚胎處理5分鐘或者更長(zhǎng)。發(fā)育時(shí)間越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶處理，發(fā)育時(shí)間長(zhǎng)的胚胎就需要用蛋白酶來(lái)疏松組織，以便于雜交。

2） 用PBST溶液輕洗，在PBST中放置5分鐘。

3） 用4%多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。

4） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。

2. 預(yù)雜交

1）每個(gè)管中置換成大約300ulHYB－溶液，60℃水浴5分鐘，tunel技術(shù)服務(wù)，避免振蕩。

2）用等體積的HYB+取代HYB－。

3）60℃水浴，預(yù)雜交4小時(shí)以上。

3. 雜交

1）吸去預(yù)雜交的HYB+，加上100ul已加入探針的HYB+溶液（探針濃度約為1ng/ul）..

2）60℃ 溫浴過(guò)夜。注：雜交與預(yù)雜交的溫度可以是55到60度不等，溫度越低，探針結(jié)合越好，溫度越高，背景越小。

分子病理檢測(cè)的意義

精1準(zhǔn)醫(yī)學(xué)時(shí)代的分子l靶向基因檢測(cè)

精1準(zhǔn)醫(yī)學(xué)概念的提出使各醫(yī)學(xué)學(xué)科在診療方式、治1療手段上都發(fā)生著翻天覆地的變化，但精1準(zhǔn)的治1療首先必須依托于精1準(zhǔn)的診斷，基因狀態(tài)檢測(cè)則是精1準(zhǔn)診斷的#步。基因檢測(cè)可以診斷疾病，也可以用于疾病風(fēng)險(xiǎn)的預(yù)測(cè)及指導(dǎo)腫1瘤靶向藥1物治1療?；驒z測(cè)是通過(guò)組織、血液、體液或細(xì)胞對(duì)DNA進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)，取被檢測(cè)者組織細(xì)胞，擴(kuò)增其基因信息后，通過(guò)特定設(shè)備對(duì)被檢測(cè)者細(xì)胞中的DNA分子信息作檢測(cè)，預(yù)知身體患疾病的風(fēng)險(xiǎn)，分析它所含有的各種基因情況，從而使人們能了解自己的基因信息。